ELISA: decodifica, metodi

Con lo sviluppo di tali scienze correlate come la genetica, la biologia molecolare, la chimica e la crescita del progresso tecnico, la medicina moderna può vantare metodi innovativi per diagnosticare varie malattie umane. Si distinguono per l'elevata precisione dei risultati e la sicurezza delle prestazioni. Uno di questi modi per identificare i problemi di salute è immunoenzimatico. Ha acquisito una popolarità diffusa negli ultimi dieci anni e si è guadagnato la reputazione di un metodo altamente efficace, affidabile e sicuro per il paziente per rilevare le malattie anche prima che compaiano i sintomi esterni. Spiegheremo chiaramente quale sia questo tipo di diagnosi, quale sia il principio del suo funzionamento, annota i vantaggi, orientandolo nel costo di tale analisi.

La reazione dell'organismo alla flora patogena

Per capire come, grazie al dosaggio immunoenzimatico, i tecnici di laboratorio diagnosticano varie malattie, è necessario comprendere il processo fisiologico che si verifica nel corpo durante l'infezione. Quando un agente patogeno entra nel flusso sanguigno, sistema immunitario umano dimostra una reazione protettiva sotto forma di rilascio di alcune sostanze - anticorpi. Si legano alla cellula e analizzano se è parte del corpo o incorporata dall'esterno. se sistema immunitario determinato che la cellula è aliena, allora la quantità di anticorpi inizia ad aumentare per combattere il microrganismo patogeno.

Gli anticorpi sono di diversi tipi, hanno le loro caratteristiche. Alcune sostanze appaiono direttamente nel periodo dell'infezione, altre rimangono per tutta la vita nel corpo umano ed è grazie a loro che sviluppano una forte immunità a una particolare malattia. Le strutture proteiche sono suddivise in tali specie: A, D, E, M, G. In medicina, gli anticorpi sono chiamati immunoglobuline. Pertanto, è consuetudine denotare la performance di queste sostanze in caratteri latini Ig.

immunoenzimatico analisi (ELISA) È basato su dati di conoscenza medica. Usando antigeni speciali in laboratorio, è possibile determinare la presenza o l'assenza di determinati anticorpi in materiale biologico. Secondo i risultati di questa analisi, il medico può fare una diagnosi, oltre a determinare non solo la presenza della patologia, ma anche la durata della sua origine, per identificare il livello di pericolo per il paziente. Nel saggio immunoenzimatico, la presenza di anticorpi dei gruppi M e G è più frequentemente esaminata.

Cos'è un ELISA?

In realtà, il dosaggio immunoenzimatico non è un'innovazione della società moderna. È stato inventato negli anni '80. Ma per tali studi sono richieste attrezzature ingombranti e costose. Pertanto, questo metodo è stato utilizzato solo in laboratori scientifici appositamente attrezzati: è stato utilizzato per la tipizzazione di cellule e tessuti. Ma a quel tempo non era molto usato in medicina diagnostica, era tecnicamente difficile ed estremamente costoso da usare. Solo con lo sviluppo della tecnologia e l'invenzione di materiali in biopolimeri, ELISA è migliorata. Successivamente, il metodo è diventato popolare e ha acquisito sicurezza nei circoli medici.

Come accennato in precedenza, questo metodo comporta la rilevazione nel biomateriale - sangue, liquido amniotico, corpo vitreo o liquido cerebrospinale - alcuni gruppi di immunoglobuline.

Esistono studi senza applicare l'antigene alla superficie e il saggio di immunoassorbimento legato all'enzima, che comporta l'esecuzione della reazione in appositi pozzetti. Quest'ultimo metodo ha una maggiore sensibilità e affidabilità, quindi è così che vengono analizzati nei laboratori medici per l'individuazione di malattie umane.

Fase Immunoassay

A seconda della malattia in questione, un kit per immunoassay enzimatico utilizza l'antigene necessario, che durante una reazione chimica in presenza di un'infezione contatterà la flora patogena. Questo processo è chiamato condurre una risposta immunitaria.

Quindi, al fine di determinare visivamente il risultato dello studio, condurre la fase enzimatica ELISA. Implica la colorazione del materiale utilizzando reagenti speciali. Enzimi come fosfatasi alcalina, perossidasi e avidina sono utilizzati in questo studio. A seconda del colore risultante nel processo di esecuzione di reazioni chimiche e determinare il risultato del dosaggio immunoenzimatico.

Cos'è la colorimetria?

L'analisi della fase enzimatica della diagnosi viene effettuata utilizzando un metodo che ha il nome "colorimetria". Il fatto è che non solo il colore del materiale fornisce informazioni sull'infezione, ma anche la densità del colore risultante dalle reazioni chimiche. Questo indicatore determina la concentrazione dell'agente patogeno. Se il metodo manuale di diagnostica viene utilizzato alla vecchia maniera, viene creato uno speciale grafico di calibrazione per determinare gli indicatori indicati.

Nei moderni laboratori, il metodo manuale è usato raramente oggi. Per l'analisi dell'ELISA, viene utilizzato un dispositivo speciale: un colorimetro, in cui vengono impostati manualmente solo i parametri dello studio, quindi il dispositivo esegue automaticamente tutto il lavoro, compreso il tracciamento.

Metodi ELISA

Esistono metodi diretti e indiretti per il dosaggio immunoenzimatico. Il primo tipo richiede meno tempo, in quanto ha solo 3 fasi di implementazione. In primo luogo, gli anticorpi specifici vengono aggiunti agli antigeni del materiale studiato, posti in appositi pozzetti. Quindi rimuovere la loro quantità in eccesso ed eseguire la fase enzimatica dell'analisi, ottenendo così il risultato.

Il metodo indiretto è usato molto più spesso, in quanto ha una sensibilità maggiore rispetto al metodo diretto di diagnosi. Alla sua realizzazione la doppia ricerca è usata. Vale a dire - in primo luogo, l'antigene è associato all'anticorpo non marcato e quindi all'etichetta. Questo processo richiede più tempo, ma il risultato è il più accurato.

Kit di reagenti

I kit per immunodosaggio sono prodotti da diversi produttori, in una varietà di livelli di allestimento. In Russia, la società riconosciuta è l'Unione di Biomedicale. Questo produttore produce set di reagenti per lo studio con il metodo ELISA di quasi tutte le infezioni comuni alle nostre latitudini, che possono essere analizzate in questo modo. Oltre ai reagenti, i kit includono materiali aggiuntivi, che garantiscono la sicurezza, la praticità e la velocità dell'analisi. Inoltre, le sostanze chimiche sono verniciate in diversi colori, il che riduce la probabilità di errori nella scelta del laboratorio dei reagenti.

I kit chimico-biologici differiscono per la relativa disponibilità, che influenza direttamente la distribuzione e la disponibilità del dosaggio immunoenzimatico per la popolazione.

Vantaggi del metodo diagnostico

Indubbiamente, il dosaggio immunoenzimatico ha diversi vantaggi rispetto ad altri metodi diagnostici:

1. Con il suo aiuto, è possibile determinare anche una piccola presenza di organismi patogeni, il che indica un'elevata sensibilità del test.
2. La possibilità di rilevare la malattia nelle primissime fasi, che aumenta significativamente le possibilità di una ripresa di successo.
3. Semplicità e convenienza nel prendere materiale biologico. Questa analisi viene effettuata sia nei laboratori privati ​​che in pubblico. Se necessario, l'infermiere può portare il materiale dal paziente a casa.
4. Per l'analisi richiede una quantità molto piccola di biomateriale.
5. Risultati rapidi Le moderne attrezzature mediche ti consentono di eseguire analisi in un giorno.
6. La capacità di rilevare forme di infezione nascoste asintomatiche.
7. Studio di accessibilità
8. Se necessario, è possibile condurre sondaggi di massa usando questo metodo.
9. È possibile tracciare il decorso della malattia e l'efficacia del trattamento prescritto, poiché è possibile eseguire un'analisi ELISA ripetutamente assolutamente sicura per il paziente.
10. Automazione delle fasi di analisi, che elimina il fattore umano e aumenta l'affidabilità dei risultati.
11. I reagenti per l'esecuzione di IFA sono conservati abbastanza a lungo - circa un anno.
12. L'analisi è possibile con fluttuazioni della temperatura ambiente.

Immunoglobuline del gruppo M

Gli anticorpi del gruppo M sono prodotti dal sistema immunitario immediatamente dopo il rilevamento di un antigene estraneo. Di conseguenza, se il test immunologico enzimatico è stato completato dall'individuazione di tali sostanze nel biomateriale, questo indica lo stadio acuto della malattia, l'infezione primaria. Le immunoglobuline del gruppo M possono essere nel corpo fino a un mese a seconda del tipo di infezione. Quindi il loro numero diminuisce fino alla completa estinzione.

Immunoglobuline del gruppo G

Sostituito dal gruppo immunoglobulinico M appare struttura proteica della forma G. Queste sostanze producono una forte, nella maggior parte dei casi, l'immunità permanente alla malattia. La determinazione della struttura proteica delle IgG nel materiale in studio indica che l'organismo ha precedentemente incontrato l'agente patogeno e ha una reazione protettiva contro la reinfezione.

Indicazioni per la diagnosi

Un test immunoenzimatico viene utilizzato per determinare varie malattie infettive, condizioni ormonali e test allergologici. Vale a dire:

• determinare il livello degli ormoni tiroidei;
• indicatori del pannello ormonale riproduttivo;
• marcatori tumorali;
• rilevare agenti infettivi come citomegalovirus, epatite, toxoplasma, rosolia, morbillo, tubercolosi, clamidia, sifilide, micoplasma, ureplasma, candida, giardia e persino HIV;
• sono diagnosticati malattie autoimmuni. Compreso spesso usato per lo studio degli ormoni tiroidei saggio immunoassorbente legato all'enzima: TSH, TG, T3 e T4.

Oltre agli scopi diagnostici, il metodo del saggio immunologico enzimatico viene utilizzato nelle attività di ricerca medica.

Come viene preso il materiale?

Nella maggior parte dei casi, il prelievo di sangue venoso è raccomandato per l'analisi. Dopo l'elaborazione e la preparazione del materiale per lo studio, viene eseguito il saggio immunologico. siero di sangue o plasma.

Lo studio del pannello ormonale richiede una particolare attenzione, poiché in questo caso è estremamente importante tenere conto delle caratteristiche del consumo di materiale. Ad esempio, la diagnosi della maggior parte degli ormoni del sistema riproduttivo femminile richiede l'assunzione di sangue venoso in determinati giorni del ciclo mestruale. Un certo numero di altri ormoni sono influenzati da fattori esterni: stagionalità, tempo del giorno, stato psicologico del paziente e molto altro. Senza tenere conto di fattori specifici, è possibile ottenere un risultato falso, che porterà ad esacerbazioni della malattia o trattamenti impropriamente prescritti.

In alcuni casi, più spesso complicati, un liquido cerebrospinale, il corpo vitreo o il liquido amniotico di una donna incinta possono essere necessari per l'analisi. Le procedure per la raccolta di questi materiali biologici comportano un certo rischio, hanno controindicazioni e un periodo di recupero. Pertanto, dovrebbe essere effettuato solo in base alla testimonianza di un medico e sotto la sua supervisione professionale di un test immunoenzimatico. La decodifica in questo caso richiede conoscenze mediche speciali e potrebbe richiedere del tempo.

Preparazione per l'analisi

Il saggio immunologico enzimatico deve essere eseguito, rispettando tutte le raccomandazioni, poiché i fattori esterni influenzano i risultati dello studio. Ad esempio, è importante assumere sangue venoso a stomaco vuoto al mattino (fino a 11 ore). 2 settimane prima della raccolta prevista del materiale, è necessario interrompere l'assunzione di qualsiasi farmaco, soprattutto ormonale. Alcuni giorni prima lo studio dovrebbe astenersi dall'uso di alcol e cibi grassi, oltre a eliminare lo sforzo fisico, le esperienze e lo stress.

Decodifica risultati

La decodifica dei risultati di un saggio immunoenzimatico richiede una conoscenza speciale delle peculiarità delle strutture proteiche (anticorpi), che sono state descritte sopra (IgG e IgM). In base a questi dati, vengono analizzati gli indicatori di ricerca. La tabella descrive le opzioni che è possibile ottenere durante l'analisi:

Analizzando la tabella presentata, possiamo concludere che nella maggior parte dei casi saranno necessari ulteriori studi per confermare la diagnosi. Non può dare una risposta definitiva solo al dosaggio immunoenzimatico. La norma in questo caso non ha confini chiari: le proteine ​​rilevate del gruppo G indicano solo che l'organismo è stato precedentemente sottoposto a infezione da un determinato agente patogeno. Ma lo stesso risultato può indicare la presenza di una fase acuta - è importante confrontare molti fattori e indicatori per fare una diagnosi corretta.

Fattori di rischio

ELISA è accurato al 90%. Tuttavia, vi sono fattori di rischio che influiscono sulla distorsione del risultato diagnostico: malfunzionamento delle apparecchiature, raccolta impropria del materiale, stoccaggio e trasporto e trascuratezza di altri fattori esterni.

Non è consigliabile eseguire la diagnostica dopo trasfusioni di sangue, emolisi, chirurgia, biopsia o puntura di materiale biologico - questo può anche influenzare i risultati degli indicatori.

Costo dell'analisi

Il costo di uno studio diagnostico ha una vasta gamma e dipende dal tipo di analisi e dall'antigene da determinare, poiché, sulla base di questi fattori, viene calcolato il costo dei kit di reagenti e viene determinata la complessità dell'analisi. Ma nella maggior parte dei casi, l'ELISA è disponibile per molti pazienti. Il suo prezzo varia da 300 p. fino a 2000 p.

ELISA è un metodo economico, rapido ed estremamente efficace per diagnosticare una vasta lista di malattie. Ma solo un professionista medico qualificato ha il diritto di occuparsi dell'interpretazione dei risultati e della diagnosi.